Набор для извлечения плазмид в среднем объёме с удалением эндотоксинов (PLUS) (TD435-PLUS)
| Артикул | Упаковка, спецификация | Подразделение | Цена (юаней) |
| TD435-PLUS-10 | 10 раз | Коробка | 100 |
| TD435-PLUS-50 | 50 раз | Коробка | 350 |
| TD435-PLUS-200 | 200 раз | Коробка | 1400 |
Ключевые слова
Описание продукта
Часто задаваемые вопросы
Информация о продукте
Связанные документы
Компания GENSTONE BIOTECH представляет набор для выделения плазмидной ДНК с крайне низким уровнем эндотоксинов — среднего объёма (версия PLUS, артикул: серия TD435‑PLUS). Это усовершенствованное решение для очистки, специально разработанное для получения плазмидной ДНК сверхнизкого уровня эндотоксинов и высокой степени чистоты; оно особенно подходит для чувствительных последующих экспериментов, требующих строгого контроля над чистотой нуклеиновых кислот.
Настоящий набор реагентов, основанный на высокоэффективном выделении плазмидной ДНК, обладает ключевым преимуществом — в нём интегрирована уникальная… Цветная реакция С профессионалом Схема удаления эндотоксинов В ходе проведения эксперимента изменения цвета раствора — например, малиновый цвет образца P1, бледно‑розовый после лизиса и жёлтый после нейтрализации — позволяют сразу же оценить текущее состояние реакции, что существенно повышает наглядность и управляемость процесса. В сочетании со специальным раствором для удаления эндотоксинов и оптимизированной процедурой очистки можно эффективно адсорбировать и удалять эндотоксины из образцов.
Ключевые характеристики данного набора реагентов включают:
Сверхнизкий остаток эндотоксинов : Благодаря использованию уникальной технологии удаления эндотоксинов, после очистки содержание эндотоксинов в плазмидной ДНК может быть снижено до ≤0,05 ЕД/мкг , достигая уровня «сверхнизкого остаточного содержания» и даже уровня «отсутствия эндотоксинов (≤0,025 ЕД/мкг)», что соответствует требованиям высокотехнологичных приложений, таких как генная терапия, производство AAV, исследования CAR‑T‑клеток и трансфекция крайне чувствительных клеток.
Интуитивно понятное и безопасное управление : Цветная реакция обеспечивает индикацию на протяжении всего процесса, не требуя сложных интерпретаций. В ходе процедуры не используются токсичные реагенты, такие как фенол и хлороформ, а также не требуется осаждение этанолом — это безопасно и удобно.
Высокая чистота и высокая производительность : Высокая чистота выделенных плазмид — отношение A260/A280 ≥ 1,8, отношение A260/A230 ≥ 2,0; выход при каждом извлечении достигает Более 200 мкг . Коэффициент извлечения плазмиды составляет 60–80% (после стадии удаления эндотоксинов).
Быстро и гибко : Базовый процесс извлечения (первая часть) занимает всего около 20–30 минут (методом вакуумного давления или центрифугирования). При необходимости достижения предельной чистоты можно выполнить дополнительную вторую часть — глубокое удаление эндотоксинов; общее время составит примерно 45 минут. Одновременно поддерживается Центробежный С и Отрицательное давление Два режима очистки, соответствующие различным уровням пропускной способности и условиям работы оборудования.
Широкая совместимость ： Может эффективно извлекать крупные плазмиды размером до 25 кб. , подходит для плазмид с высокой и низкой копируемостью.
Основной компонент Комплект включает раствор RNase A, суспензирующий буфер P1 (красного цвета), лизисный буфер P2, нейтрализующий буфер P4, раствор для удаления эндотоксинов, предварительный промывочный раствор для плазмидной ДНК, моющий раствор Endo‑Free для плазмидной ДНК, воду без ДНКазы и РНКазы, колонку для очистки PN № 3, сборный контейнер объёмом 2 мл и воронку объёмом 25 мл (для работы под вакуумом).
Нижние приложения : Плазмидная ДНК сверхнизкой концентрации эндотоксинов и высокой степени чистоты, полученная в данном наборе, может непосредственно использоваться в экспериментах, предъявляющих крайне жёсткие требования к качеству нуклеиновых кислот, например… Трансфекция клеток (в особенности первичных клеток, стволовых клеток и иммунных клеток), экстраклеточная транскрипция, упаковка вирусов (например, AAV), эксперименты in vivo, исследования в области генной терапии А также стандартные методы, такие как энзиматическое расщепление ДНК, клонирование, секвенирование и ПЦР.
Комплект реагентов для извлечения плазмидной ДНК среднего объёма TD435-PLUS
Реагент‑набор для выделения плазмид высокой чистоты с крайне низким уровнем эндотоксинов; использует цветную систему для наглядного контроля хода эксперимента; поддерживает как вакуумный, так и центрифужный методы; содержание эндотоксинов — ≤0,05 ЕД/мкг.
Ключевые преимущества
- Сверхнизкий уровень эндотоксинов : Содержание эндотоксина ≤0,05 ЕД/мкг
- Цветовая индикация : P1 Красный → расщепление до бледно‑розового → нейтрализация с переходом в жёлтый, наглядный контроль
- Безопасность эксплуатации : Не требуются токсичные реагенты, такие как фенол или хлороформ
- Гибкий и эффективный : Поддержка метода отрицательного давления (~20 мин) и центрифужного метода (~30 мин)
Технические параметры
- Уровень эндотоксина : Регулярное выделение 0,05–1 ЕД/мкг
- Показатель чистоты : A₂₆₀/A₂₈₀≥1,8, A₂₆₀/A₂₃₀≥2,0
- Рекомендуется OD : OD₆₀₀=2–3, выращивание в течение ночи — 14 ч
- Выход плазмиды : Коэффициент извлечения после глубокой очистки — 60–80%
Ключевое внимание
- P1 предварительная обработка : Необходимо добавить RNaseA до конечной концентрации около 100 мкг/мл
- Приготовление моющего раствора : При первом использовании необходимо добавить безводный этанол
- Контроль бактериального раствора : Избегайте избыточного объёма бактериального раствора, чтобы предотвратить остаточное присутствие геномной ДНК.
- Условия хранения : Хранение различных компонентов при разных температурах
Комплект для выделения плазмидного ДНК среднего объёма TD435‑PLUS, очищенный от эндотоксинов — часто задаваемые вопросы (10 наиболее полезных)
Настоящий продукт производится по комбинированной технологии, включающей специальный раствор для удаления эндотоксинов и колонную очистку; содержание эндотоксинов может быть снижено до ≤0,05 ЕД/мкг , при обычном извлечении достигается 0,05–1 ЕД/мкг,
Отвечает требованиям высокочувствительных сценариев, таких как трансфекция на уровне клеточной линии, подготовка AAV‑векторов, CAR‑T‑терапия, трансфекция первичных клеток и стволовых клеток, а также доклинические исследования;
Только первая часть процесса обеспечивает стандартную трансфекцию клеток, тогда как вторая, более глубокая обработка, позволяет достичь сверхнизкого уровня остатков и соответствовать уровню, свободному от эндотоксинов.
Только P1: красный → расщепляется до бледно‑розового → нейтрализуется, приобретая жёлтую окраску; таким образом можно наглядно оценить состояние эксперимента:
- Клетки не полностью ресуспендированы: Неравномерная окраска и наличие комков — признаки неполного пиролиза и снижения выхода.
- Неполный крекинг: Бледно‑розовый, мутный, неплотный → остатки геномной ДНК, снижение чистоты
- Неполное нейтрализование: Красный цвет ещё не полностью исчез → низкая эффективность удаления белка и эндотоксинов, подавление последующих экспериментов
Весь процесс не требует дополнительных проверок, что значительно снижает вероятность ошибок при работе новичков.
Совсем не нужно Токсичные реагенты, такие как фенол и хлороформ, также не требуют стадии осаждения изопропиловым спиртом или этанолом:
Безопасность: Отсутствие риска токсичности и остаточного загрязнения со стороны органических реагентов
Высокая эффективность: Методом отрицательного давления — около 20 минут, методом центрифугирования — около 30 минут.
Высокая чистота: Отсутствие влияния органических растворителей позволяет непосредственно использовать плазмиды для рестрикционного расщепления, секвенирования и трансфекции.
Стабильность: Избегайте потерь вследствие осаждения, повышая коэффициент извлечения и стабильность партий.
| Способ | Тратящий время | Применимые сценарии | Ключевые моменты |
|---|---|---|---|
| Метод отрицательного давления | Около 20 минут | Высокая пропускная способность, параллельная обработка множества образцов | Требуется использовать вакуумный мультикомплект; жидкостная фильтрация осуществляется быстрее, а остаток на мембране — меньше. |
| Центробежный метод | Около 30 минут | Однообразцовое оборудование без избыточного давления | Каждый раз подача образца — не более 800 мкл; необходимо повторять подачу образца до полного фильтрования смеси. |
Оба варианта обеспечивают одинаковое удаление эндотоксинов, выход и степень чистоты; выбор можно осуществлять в зависимости от имеющегося лабораторного оборудования.
Низкий выход: ОД культуральной жидкости > 3, клетки не ресуспендированы, осадок P2 получен при низкой температуре, отсасывание осадка и элюирование недостаточны → контролировать ОД на уровне 2–3, восстанавливать осадок P2 при 37 °C, не отсасывать осадок, предварительно подогреть элюент.
Превышение нормы эндотоксина: Чрезмерное количество микроорганизмов, наличие эндотоксинов в расходных материалах, недостаточное перемешивание раствора для удаления эндотоксинов — следует строго контролировать объём образца, использовать исключительно эндотоксин‑свободные расходные материалы и обеспечивать тщательное встряхивание или 360°‑переворот для равномерного смешивания.
Остатки РНК: P1 без добавления РНКазы A, избыточная концентрация бактерий → P1 обязательно с добавлением РНКазы A, хранение при 4 °C, уменьшение объёма бактериального раствора
P1: Необходимо добавить RNase A до конечной концентрации около 100 мкг/мл и хранить при 4 °C; пропуск добавления или инактивация — серьёзные остатки РНК и завышенная концентрация.
Средство для мытья Endo-Free: При первом использовании применяют пропорциональное добавление безводного этанола (15 мл + 60 мл; 60 мл + 240 мл); при отсутствии добавления — плазмида не удерживается на колонке, экстракция завершается неудачно.
Раствор для удаления эндотоксинов: Хранить при температуре 4℃; перед использованием тщательно перемешать — это не влияет на эффективность.
Рекомендация OD₆₀₀=2–3 , оптимальное время выращивания в течение ночи — около 14 часов; объём образца подбирают в соответствии с оптической плотностью (например, при OD=2 — 15 мл, при OD=10 — 3 мл)
Вред от избыточного количества бактериального раствора:
- Неполный расщепление и нейтрализация — значительное остаточное содержание геномной ДНК и белков.
- Перегрузка РНК, РНаза A не способна полностью её расщепить.
- Концентрация эндотоксинов резко возросла, значительно превысив возможности их удаления.
- Перегрузка колонки очистки приводит к одновременному снижению выхода и чистоты.
Регулярная трансфекция клеток: Достаточно только первой части; содержание эндотоксина ≤ 1 ЕД/мкг — соответствует требованиям.
Первичные клетки, стволовые клетки, AAV/CAR‑T‑клетки, эксперименты на живых организмах: Обязательно выполните вторую часть, уровень эндотоксина можно снизить до ≤0,05 ЕД/мкг
Коэффициент回收: После глубокой обработки коэффициент извлечения плазмид составляет 60–80%, а снижение концентрации на 10–30% считается нормой; после удаления РНК и примесей наблюдается более высокая фактическая чистота и большая стабильность в последующих этапах.
Соответствие стандарту чистоты: A₂₆₀/A₂₈₀≥1,8, A₂₆₀/A₂₃₀≥2,0; отсутствие белков, солей, эндотоксинов, остатков РНК и геномной ДНК.
Можно использовать напрямую: Высокочувствительные эксперименты — такие как энзиматическое расщепление, трансформация, ПЦР, экстраклеточная транскрипция, секвенирование по Сэнгеру и высокопроизводительное секвенирование, трансфекция клеток, экстраклеточное редактирование, доклинические исследования и др. — не требуют вторичной очистки.
Хранить при 4℃: РНКаза A, P1, раствор для удаления эндотоксинов, предварительный промывочный раствор для плазмидной ДНК
Хранение при комнатной температуре: P2, P4, моющий раствор Endo-Free, безэнзимная вода, колонка для очистки, сборочные трубки, воронка
Обработка исключений:
- P2 Низкотемпературная мутность: Растворить в водяной бане при температуре 37 °C; не взбалтывать энергично во избежание образования пены.
- Мутность раствора для удаления эндотоксинов: 4℃ — нормальное явление; перед использованием тщательно перемешайте.
Подсказка: Все реактивы следует хранить вдали от высоких температур, яркого света и длительного открытого хранения во избежание потери эффективности.
Связанные продукты
Консультация по заказу: менеджер Ху
Консультация по заказу: менеджер Ан
Консультация по заказу конечного пользователя-заказчика из области научных исследований
Техническая консультация: технический специалист Бай
Служба поддержки клиентов
Douyin
Видео-аккаунт WeChat
Kuaishou
Контакты
Jianshi Biotechnology (Beijing) Ltd. Компания с ограниченной ответственностью.
Адрес компании: г. Мапо, район Шуньи, г. Пекин, дом 12, дом 11, комната 401
Телефон: 86 18640171737
Электронная почта: gwang@jianshibio.com
Jianshi Biotechnology (Zhejiang) Ltd. Компания с ограниченной ответственностью.
адрес: город Юяо, провинция Чжэцзян
Телефон: 86 18640171737
Оставить сообщение
Если вас заинтересовали наши продукты, пожалуйста, оставьте свой номер телефона.
Проконсультироваться сейчас →Подписка на продукт
Подпишитесь на нас, чтобы быть в курсе обновлений продуктов и специальных предложений
Авторское право: Jianshi Biotechnology (Beijing) Co., Ltd. Powered by：CEglobal