Рекомбинантный человеческий белок TNF-α/TNFA, C-концевой фьюзиновый домен Fc (JSP005)
Название продукта | Артикул товара | Упаковка: спецификация | Цена |
Рекомбинантный человеческий фактор некроза опухоли α | JSP005 | 50 мкг | Запрос цены |
100 мкг | Запрос цены | ||
1mg | Запрос цены |
Ключевые слова
Категория
Описание продукта
Часто задаваемые вопросы
Информация о продукте
Связанные документы
Recombinant Human TNF-α/TNFA Protein, C-terminal Fc Fusio компании JianShi Bio (артикул: JSP005)
Обзор продукта
Рекомбинантный человеческий фактор некроза опухоли α (TNF‑α, с C‑концевым Fc‑фрагментом) экспрессируется в эукариотических клетках HEK293; зрелый участок TNF‑α не содержит N‑гликозилирования, а Fc‑область обладает консервативными гликозилированными модификациями. C‑конец включает триплексный линкер (G4S)₃ и сайт расщепления протеазой TEV, что позволяет удалить Fc‑тег для контрольных экспериментов. Белок склонен к образованию гексамерной структуры; уровень эндотоксинов составляет менее 1 ЕД/мкг. Активность подтверждена тестом цитотоксичности на клетках L929; продукт подходит для скрининга антител против TNF, оценки нейтрализующей активности и исследований, связанных с сигнальными путями воспаления. Продукт представляет собой стерильный фильтрованный раствор белка концентрацией 0,22 мкм, разработанный по формуле с низким уровнем адсорбции на стенках сосудов. Человеческий TNF‑α способен активировать мышиный TNFR1 и может использоваться в тесте цитотоксичности на клетках L929. Для Fc‑фьюзионного белка недопустимо напрямую применять дозовые данные, полученные для свободного TNF‑α; необходима самостоятельная калибровка. Транспортировка осуществляется с сухим льдом; предназначен исключительно для научно-исследовательских работ (RUO), не предназначен для клинического применения. К товару прилагаются сертификат анализа (COA) и паспорт безопасности вещества (MSDS).
Характеристики продукта
- ※ Эукариотическая экспрессия HEK293 с C‑концевым фьюжном IgG1 Fc : Экспрессирован в эукариотических клетках HEK293. Зрелый фрагмент TNF‑α не содержит N‑гликозилирования, тогда как Fc‑область обладает консервативным гликозилированием. Снабжён трёхзвенным линкером (G4S)₃ и сайтом расщепления протеазой TEV для удаления Fc‑тега с целью проведения контрольных экспериментов.
- ※ Специальное свойство сборки гексамера : В растворе фузийный белок склонен агрегироваться в гексамеры. Для оценки состояния олигомеров перед использованием рекомендуется применять SEC‑MALS или аналитическую SEC. Не следует напрямую переносить данные о дозо‑ответной зависимости, полученные для мономерного тримера TNF‑α.
- ※ Подтверждённая цитотоксическая биологическая активность и низкое содержание эндотоксинов : Цитотоксическая активность подтверждена методом на клетках L929. Эндотоксин — менее 1 ЕД/мкг (тест LAL). Представлен в виде стерильного фильтрованного раствора белка концентрацией 0,22 мкм, содержащего буферную систему с низкой адсорбционной способностью для уменьшения потерь вследствие связывания с стенками контейнера.
- ※ Множественные приложения для исследований in vitro : Предназначен для скрининга и оценки нейтрализующей активности антител против TNF, исследований NF‑κB и воспалительных путей, а также функциональных анализов, связанных с Fc‑фрагментом, включая взаимодействие с рецептором FcRn, связывание с Fc‑рецепторами, оценку ADCC и CDC. Может использоваться в качестве положительного контроля при проведении Western blot и в качестве лиганда для ELISA/SPR.
- ※ Напоминание о межвидовом взаимодействии : TNF‑α человеческого происхождения способен активировать рецептор TNFR1 мыши, что позволяет использовать его в тесте цитотоксичности на клетках L929. Рекомендуется провести предварительную валидацию перед проведением ин‑виво‑исследований с межвидовым переносом.
- ※ Различные варианты упаковки, доставка сухим льдом и полный пакет документов : Доступно в концентрациях 50 мкг, 100 мкг и 1 мг. Строго избегайте многократного замораживания‑оттаивания и интенсивного вихревого перемешивания, поскольку это может нарушить сборку тримера‑гексамера. Отправляется с сухим льдом. Сертификат анализа (COA) и паспорт безопасности (MSDS) предоставляются исключительно для исследовательского использования только в условиях «для исследования in vitro» (RUO).
Технические характеристики рекомбинантного человеческого фактора некроза опухоли α (TNF‑α, с C‑концевым Fc‑фрагментом) — подробная спецификация (все форматы)
| Классификация по спецификации | Артикул | Название продукта | Упаковка: спецификация | Изображение продукта |
|---|---|---|---|---|
| Рекомбинантный человеческий фактор некроза опухоли α (TNF‑α, с C‑концевым Fc‑фрагментом) | ДЖСП005‑50 | Рекомбинантный человеческий фактор некроза опухоли α (TNF‑α, с C‑концевым Fc‑фрагментом) | 50 мкг |
ДЖСП005‑50
|
| ДЖСП005‑100 | Рекомбинантный человеческий фактор некроза опухоли α (TNF‑α, с C‑концевым Fc‑фрагментом) | 100 мкг |
ДЖСП005‑100
|
|
| ДЖСП005‑1000 | Рекомбинантный человеческий фактор некроза опухоли α (TNF‑α, с C‑концевым Fc‑фрагментом) | 1 мг |
ДЖСП005‑1000
|
JSP005 Рекомбинантный человеческий фактор некроза опухоли α (TNF‑α, C‑концевой фрагмент с Fc‑фузия)
Эукариотическая экспрессия HEK293 | Фузийный белок TNF‑α‑Fc — часто задаваемые вопросы (FAQ)
Характеристики продукта и молекулярная информация
- Артикул JSP005 : 50 мкг / 100 мкг / 1 мг
- Экспрессия хозяина : HEK293 (зрелый фрагмент TNF‑α без N-гликозилирования)
- Теги : Человеческий IgG1‑Fc для терминального использования, содержит сайт расщепления TEV‑протеазой
- Способ очистки : Аффинная хроматография на Protein A/G для очистки
Основные показатели качества
- Чистота : ≥95% (восстановленный SDS‑ПАГЭ)
- Цитотоксическая ЭД₅₀ клеток L929 : 55,6–81,5 пг/мл
- Эндотоксин : <1 ЕД/мкг
- Форма : Стерильная фильтрация жидкого белка размером 0,22 мкм
Хранение, транспортировка и рецептура
- Хранение в исходном растворе : ‑20~‑80℃, в защищённом от света месте, 6 месяцев
- Транспортировка : Транспортировка сухого льда
- Буферный раствор : 1×PBS pH 7,4, с BSA, трегалозой и твином-20
- Класс продукта : Научно-исследовательский уровень RUO
JSP005 Рекомбинантный человеческий белок‑фузия TNF‑α‑Fc: часто задаваемые вопросы (10 пунктов)
Экспрессия в эукариотических клетках HEK293; зрелый фрагмент TNF‑α не подвергается N‑гликозилированию, C‑конец содержит фьюзедный фрагмент Fc человеческого IgG1.
Зрелая последовательность TNF‑α: Val77–Leu233; соединена с Fc фрагментом посредством (G4S)3‑линкера, в котором имеется сайт расщепления протеазой TEV, что позволяет удалить Fc‑тег.
Мономер нативного TNF‑α составляет около 17 кДа, мономер Fc — около 25 кДа, теоретическая масса фузийного мономера — 42 кДа; на восстановленном SDS‑ПААГ полоса имеет молекулярную массу 40–50 кДа, при этом полосы чёткие и не расплываются. Раствор данного препарата склонен к образованию Гексамер (Два тримера TNF‑α димеризованы через Fc и соединены параллельно), что отличается от простого тримера обычного свободного TNF‑α; для определения состояния естественной агрегации необходимы экспериментальные данные, полученные методами SEC‑HPLC и MALS.
Токсичность фибробластов мыши L929 (сенсибилизация доксорубицином): ED₅₀: 55,6–81,5 пг/мл; чистота ≥ 95%, эндотоксин < 1 ЕД/мкг.
Активность подтверждена в состоянии полноценного фузиона TNF‑α‑Fc Фц‑фузия изменяет кросс‑линкинговый стехиометрический баланс рецепторов, Нельзя напрямую переносить данные о доза‑эффекте, полученные для чистого TNF‑α. Все фактические показатели должны соответствовать данным сертификата анализа (COA), полученным для данной партии.
1. Экстракорпоральные клетки: исследование апоптоза и цитотоксического действия опухолевых клеток, воспалительных путей NF‑κB/MAPK, механизмов активации эндотелия;
2. Оценка антител: оценка нейтрализующей активности моноклональных антител против TNF, скрининг антител, лиганды для SPR/ELISA;
3. Функции Fc: связывание с FcRn и Fc-рецепторами, экстракорпоральные оценки, связанные с ADCC/CDC;
4. Молекулярные эксперименты: стандартные образцы для иммунного анализа, положительный контроль для Вестерн-блоттинга.
Транспортировка сухого льда; исходный раствор хранить при температуре от ‑20 до ‑80 °C в защищённом от света месте, категорически запрещается подвергать многократному замораживанию и оттаиванию.
Не вскрытый концентрат — хранить в темноте при температуре от ‑20 до ‑80 °C; срок годности — 6 месяцев. При кратковременном хранении при температуре 2–8 °C срок не должен превышать 7 дней.
После вскрытия флакона разлить по однократным дозам и заморозить; многократное замораживание‑размораживание повреждает тримерные интерфейсы TNF‑α, приводя к диссоциации, агрегации и потере активности; рекомендуется проводить не более одного цикла замораживания‑размораживания, а после розлива использовать в течение месяца.
Рекомендуется размораживать при температуре 2–8 °C медленным способом; не допускается длительное нахождение при комнатной температуре.
Перед использованием briefly центрифугируйте, чтобы жидкость со стенок пробирки стекла на дно, и перемешивайте только аккуратным переворачиванием.
Разведение: проводят постепенное разведение в стерильном PBS без эндотоксинов, содержащем 0,1% BSA/HSA, либо в полной культуральной среде.
ФЦ‑фузийный белок в низких концентрациях легко адсорбируется на стенках трубок, поэтому рекомендуется использовать их на всех этапах разведения и розлива. Центрифужные пробирки с низким уровнем адсорбции 。
Преимущества метки Fc : повышение физико-химической стабильности белка и снижение адсорбции на стенках трубок; продление периода полувыведения in vivo за счёт FcRn; возможность проведения экспериментов, изучающих функции FcRn, Fc‑рецепторов, ADCC и CDC; очистка с использованием Protein A/G; антитела против человеческого Fc‑фрагмента для идентификации методами ВЭБ, SPR и ИФА.
Экспериментальный риск ：
1. Белок склонен к агрегации в гексамеры; его механизм сцепления с рецепторами отличается от такового у свободного TNF‑α, поэтому он не может напрямую переносить дозу свободного фактора.
2. IgG1‑Fc может опосредовать кросс‑линкинг FcγR и эффекты ADCC/CDC; в присутствии клеток, экспрессирующих FcγR, и комплементарной системы сигналы Fc‑фрагмента могут усиливать или даже маскировать саму биологическую активность TNF‑α.
3. В организме животных необходимо оценить иммуногенность, обусловленную Fc-фрагментом.
Линкер содержит сайт расщепления ферментом TEV, поэтому можно с помощью TEV удалить метку Fc, однако Нельзя использовать сразу после энзиматического расщепления. 。
После ферментативного удаления Fc‑фрагмента мономер TNF‑α необходимо повторно собрать в активный тример; эффективность экстравазального реассоциации требует самостоятельной оптимизации и проверки пользователем; по завершении ферментативного расщепления Необходимо повторно определить биологическую активность методом цитотоксического теста на клетках L929. , нельзя использовать прежнюю рабочую концентрацию белков-химер.
Человеческий TNF‑α способен распознавать и активировать мышиный рецептор TNFR1, поэтому его можно использовать для оценки цитотоксической активности на мышиных клетках L929.
Однако фрагмент Fc обладает видовыми особенностями; в организме животных наблюдается сложная совокупность эффектов, поэтому при проведении in vivo‑экспериментов необходимо самостоятельно проводить предварительные исследования для оценки биологических эффектов и дозировки препарата; нельзя просто переносить концентрации, полученные в клеточных экспериментах in vitro.
Раствор буфера: стерильная фильтрация 1×PBS при pH 7,4 через фильтр с порами 0,22 мкм, добавление 0,1% BSA, 5% трегалозы и 0,01% твин‑20.
Внешний вид: прозрачная жидкость, без видимых невооружённым глазом посторонних включений; зрелый фрагмент TNF‑α не гликозилирован, полосы на SDS‑ПААГ чёткие, диффузия, обусловленная гликозилированием, отсутствует.
При появлении помутнения или обильного осадка в виде хлопьев это свидетельствует о агрегации белка и диссоциации тримеров с потерей активности; не использовать далее.
- ✅ Преимущества: фьюзия с Fc повышает стабильность белка и снижает адсорбцию на стенках сосудов при низкой концентрации; поддерживает исследования функций, связанных с Fc, таких как взаимодействие с FcRn, ADCC и CDC; экспрессия в эукариотической системе HEK293, низкое содержание эндотоксинов; подходит для оценки нейтрализующей активности препаратов против TNF; наличие расщепляемого маркера TEV.
- ⚠️ Ограничения: раствор преимущественно образует гексамеры, механизм кросс‑линкинга рецепторов отличается от естественного мономерного тримера; нельзя напрямую применять дозы, рассчитанные для свободного TNF‑α; Fc‑фрагмент вносит помехи за счёт сигналов, связанных с Fc‑рецепторами; после протеолиза TEV‑протеазой необходимо самостоятельно осуществить реассоциацию тримеров и повторную оценку активности.
Связанные продукты
Консультация по заказу: менеджер Ху
Консультация по заказу: менеджер Ан
Консультация по заказу конечного пользователя-заказчика из области научных исследований
Техническая консультация: технический специалист Бай
Служба поддержки клиентов
Douyin
Видео-аккаунт WeChat
Kuaishou
Контакты
Jianshi Biotechnology (Beijing) Ltd. Компания с ограниченной ответственностью.
Адрес компании: г. Мапо, район Шуньи, г. Пекин, дом 12, дом 11, комната 401
Телефон: 86 18640171737
Электронная почта: gwang@jianshibio.com
Jianshi Biotechnology (Zhejiang) Ltd. Компания с ограниченной ответственностью.
адрес: город Юяо, провинция Чжэцзян
Телефон: 86 18640171737
Оставить сообщение
Если вас заинтересовали наши продукты, пожалуйста, оставьте свой номер телефона.
Проконсультироваться сейчас →Подписка на продукт
Подпишитесь на нас, чтобы быть в курсе обновлений продуктов и специальных предложений
Авторское право: Jianshi Biotechnology (Beijing) Co., Ltd. Powered by：CEglobal