Метод зондов MethyPrecise® для определения метилирования, qPCR‑премикс (2× Methy‑qPCR Mix) (JSR‑E‑206, JSR‑E‑207)
Артикул товара | Упаковка, спецификация | Цена |
JSR-E-206 | 100 раз | 580 |
JSR-E-207 | 500 раз | 2680 |
Ключевые слова
Категория
Описание продукта
Часто задаваемые вопросы
Информация о продукте
Связанные документы
Пробный метод определения метилирования с использованием qPCR‑препарата MethyPrecise® от компании JianShi Biotechnology (серия JSR‑E‑206)
Обзор продукта
Данный продукт представляет собой qPCR‑препарат для определения метилирования методом зонда MethyPrecise® (2× Methy‑qPCR Mix, артикул серии JSR‑E‑206), специально оптимизированный для анализа метилирования ДНК. Он изготовлен на основе генно‑инженерного фермента с термостартом и специального буфера, что повышает адаптивность к сульфитным образцам, совместимость с содержанием ГЦ в диапазоне 25–70%, устойчивость к урацилу и способность распознавать несоответствия в 3′‑конце; при этом обеспечивается высокая чувствительность и специфичность. Препарат выпускается в виде готового к использованию 2×‑смеси — достаточно добавить только праймеры, зонд и матрицу. В комплекте предусмотрены два типа ROX‑контрольных красителей — высокий и низкий, что позволяет использовать его на большинстве популярных qPCR‑приборов. Характеристики амплификации отличаются линейностью, точностью количественного анализа и высокой воспроизводимостью; он подходит для исследований, связанных с выявлением сайтов метилирования, типированием SNP и др. Рекомендуется применять в сочетании с набором модификации сульфитом JSR530. Предлагается в двух форматах: на 100 и 500 реакций; хранить при температуре −25…−15 °C; предназначен исключительно для научно‑исследовательских целей.
Особенности продукта
- Оптимизировано специально для выявления метилирования; генно‑инженерно модифицированная термостарт‑полимераза в сочетании со специальным буфером существенно повышает эффективность многократного детектирования целевых участков в условиях метилирования.
- Широкий диапазон содержания гуанина‑цитозина; подходит для образцов с содержанием ГЦ от 25% до 70%, обеспечивая охват различных участков генома для анализа метилирования.
- Конструкция с высокой устойчивостью к воздействию, обладающая отличной совместимостью с продуктами преобразования сульфитов и модифицированными матрицами урацила, снижает влияние ингибирования со стороны матрицы;
- 3'-конец обладает высокой способностью к распознаванию несоответствующих оснований, что позволяет точно различать метилированные и неметилированные сайты, обеспечивая высокую специфичность анализа.
- Высокая чувствительность и обнаружение низкого числа копий; превосходная чувствительность при многократном детектировании целевых маркеров; даже образцы с низкой степенью метилирования могут быть стабильно выявлены.
- Превосходные показатели амплификации, высокая линейность кривой амплификации, точное количественное определение целевой последовательности и высокая воспроизводимость экспериментальных результатов;
- 2× готовый к использованию предварительно смешанный раствор; требуется добавить лишь праймеры, зонды и матрицу, что упрощает процедуру и снижает ошибки при внесении образцов.
- В комплекте — двуконцентрированный референсный краситель ROX; доступны две версии — с высокой и низкой концентрацией; совместимость со всеми ведущими моделями qPCR‑приборов различных брендов, без необходимости дополнительной закупки.
- Реакционная система гибко настраивается; объём реакционной смеси от 5 до 25 мкл может быть пропорционально масштабирован, что обеспечивает соответствие различным требованиям к экспериментальной пропускной способности и объёму образцов.
- Строгое соблюдение контроля качества, годовая гарантия; стабильная и надёжная работа; предназначено исключительно для научных исследований, не используется в клинической диагностике.
Данные проверки производительности
С использованием системы метилированной qPCR были проведены эксперименты по амплификации двух генетических локусов — A и B; для каждого образца было выполнено по две параллельные реакции. Результаты были сравнены с аналогичными данными конкурентного продукта Y, что позволило оценить эффективность амплификации, линейность и чувствительность метода данного продукта.
Сравнение эффективности амплификации гена A
Конкурентный продукт того же типа Y
Цзяньши JSR‑E‑206
| Бренд | Объём преобразованных вложений | Кью 1 | Кью 2 | Среднее значение Cq (Avg) |
|---|---|---|---|---|
| Конкурентный продукт того же типа Y | 1ng | 36.10 | 36.95 | 36.53 |
| 10ng | 33.34 | 34.09 | 33.71 | |
| 20ng | 32.54 | 32.27 | 32.41 | |
| 100ng | 29.46 | 29.54 | 29.50 | |
| 200ng | 28.36 | 28.69 | 28.53 | |
| 300ng | 27.95 | 27.63 | 27.79 | |
| 500ng | 27.10 | 27.01 | 27.05 | |
| Цзяньши JSR‑E‑206 | 1ng | 36.02 | 39.18 | 37.60 |
| 10ng | 32.72 | 32.41 | 32.56 | |
| 20ng | 31.85 | 32.02 | 31.94 | |
| 100ng | 28.91 | 28.76 | 28.83 | |
| 200ng | 27.90 | 27.86 | 27.88 | |
| 300ng | 27.17 | 27.37 | 27.27 | |
| 500ng | 26.31 | 26.36 | 26.34 |
Сравнение эффективности амплификации гена B
Конкурентный продукт того же типа Y
Цзяньши JSR‑E‑206
| Бренд | Объём преобразованных вложений | Кью 1 | Кью 2 | Среднее значение Cq (Avg) |
|---|---|---|---|---|
| Конкурентный продукт того же типа Y | 1ng | 37.09 | 35.68 | 36.39 |
| 10ng | 32.73 | 33.28 | 33.01 | |
| 20ng | 31.53 | 31.31 | 31.42 | |
| 100ng | 28.69 | 28.85 | 28.77 | |
| 200ng | 27.89 | 27.70 | 27.79 | |
| 300ng | 27.01 | 26.91 | 26.96 | |
| 500ng | 26.52 | 26.17 | 26.35 | |
| Цзяньши JSR‑E‑206 | 1ng | 36.32 | 36.39 | 36.36 |
| 10ng | 32.38 | 31.62 | 32.00 | |
| 20ng | 30.74 | 30.89 | 30.81 | |
| 100ng | 27.81 | 27.74 | 27.77 | |
| 200ng | 26.61 | 26.85 | 26.73 | |
| 300ng | 26.11 | 25.30 | 25.71 | |
| 500ng | 25.30 | 25.26 | 25.28 |
Пробный метод определения метилирования MethyPrecise® от компании JianShi Biotech, qPCR‑премикс
2×Methy-qPCR‑смесь — специализированный реагент для количественного определения метилирования; часто задаваемые вопросы
Основные характеристики производительности
- Специализированный для метилирования : фермент для горячего старта + оптимизированный буфер, подходящий для проведения анализа метилирования
- Высокая переносимость и широкая совместимость : Устойчив к сульфитам, совместим с матрицами с содержанием Г/Ц от 25 до 70%
- Высокая чувствительность, высокая точность : Высокая чувствительность к выявлению низкозапасных образцов, хорошая линейность амплификации, высокая точность количественного анализа
- Простота в эксплуатации : 2× предварительно смешанная система, требуется добавить только праймеры, зонды и матрицу
Артикул, спецификация и компоненты
- JSR-E-206 : 100 реакций, предварительно смешанный раствор объёмом 1 мл
- JSR-E-207 : 500 реакций, предварительно смешанный реагент в 5 × 1 мл
- Сопутствующий краситель : В комплекте предусмотрены два типа контрольных красителей ROX High и ROX Low в концентрации 50×.
- Условия хранения : −25…−15 °C, хранить в замороженном виде в тёмном месте
Применимые экспериментальные сценарии
- Детекция метилирования : Количественное определение сайтов метилирования ДНК
- Генотипирование : СНП‑скрининг и аллельное типирование
- Преобразованный образец : Анализ образцов ДНК с использованием сульфитной конверсии
- Детекция низкокопийных образцов : Чувствительное выявление малых количеств метилированной матрицы
Часто задаваемые вопросы по высокоэффективной предварительной смеси для метилированного qPCR
Данный продукт представляет собой оптимизированную 2×‑пробную qPCR‑премикс‑формулу для выявления метилирования ДНК; в его составе использованы генноинженерно модифицированные термостартовые ферменты и специальная буферная система, что существенно повышает эффективность анализа образцов с уровнем метилирования.
1. Оптимизация состава: разработан на основе генно‑инженерно модифицированного фермента с термостартовым действием и оптимизированного реакционного буфера, специально адаптирован для проведения анализа метилирования;
2. Устойчивость и совместимость: обладает высокой устойчивостью к сульфитам, совместим с матрицами с содержанием гуанина‑цитозина от 25 до 70%, а также характеризуется хорошей устойчивостью к урацилу и способностью распознавать несоответствующие основания в 3′‑конце.
3. Высокие эксплуатационные характеристики: значительно повышены чувствительность и специфичность по множеству целевых последовательностей, а также уровень обнаружения низкозапасных образцов; кривая амплификации демонстрирует отличную линейность, а точность количественного определения целевых генов — высокий уровень.
4. Простота эксплуатации: 2‑компонентная предсмешанная система — при использовании достаточно добавить лишь праймеры, зонды и матрицу, что существенно сокращает число манипуляций при внесении образцов и уменьшает вероятность ошибок.
Предлагается два варианта объёмов реакции: готовый смешанный реагент в комплекте с двумя типами ROX‑контрольных красителей, что исключает необходимость дополнительной закупки сопутствующих реагентов.
1. Артикул и характеристики:
• JSR‑E‑206: спецификация для 100 реакций, включая 1 мл 2×‑препарата;
• JSR‑E‑207: спецификация для 500 реакций, включая 5 × 1 мл и 2 × предварительно смешанный реагент, что облегчает дозирование и использование;
2. Основные компоненты:
• 2×Methy-qPCR‑смесь: предварительно смешанные термоинициирующая ДНК‑полимераза, dNTP‑комплекс, оптимизированный буфер и др.;
• 50×ROX High: высоко концентрированный контрольный краситель;
• 50×ROX Low: референсный краситель низкой концентрации.
Правильное хранение и проведение процедур — ключ к обеспечению активности ферментов и стабильности амплификации.
1. Условия хранения: заморозка при температуре −25…−15 °C, хранить в тёмном месте; с даты продажи на продукт предоставляется гарантия сроком 1 год.
2. Подготовка к использованию: после извлечения поместить на лёд для оттаивания; после полного растворения аккуратно перевернуть и тщательно перемешать, затем выполнить мгновенное центрифугирование перед применением.
3. Требования к работе на приборе: после подготовки реакционной смеси и закрытия пробирок крышками следует мгновенно выполнить центрифугирование пробирок, чтобы избежать появления пузырьков воздуха внутри, которые могут помешать регистрации флуоресцентного сигнала;
4. После использования: немедленно плотно закройте флакон и поместите его на хранение при −20 °C, чтобы избежать длительного воздействия реагента на комнатную температуру.
Стандартная реакционная система объёмом 20 мкл, с чётко определёнными соотношениями компонентов, которые можно варьировать в заданных пределах в соответствии с требованиями.
1. Стандартная реакционная система объёмом 20 мкл:
• 2×Methy-qPCR‑смесь: 10 мкл
• Передний праймер (10 мкМ): 0,4 мкл
• Обратная праймер‑проба (10 мкМ): 0,4 мкл
• Зонд (10 мкМ): 0,4 мкл
• Шаблонная ДНК: добавляется по мере необходимости (рекомендуемый объём — 2 мкл)
• 50×ROX (Низкий/Высокий): 0,4 мкл
• ddH₂O: довести до 20 мкл
2. Корректировка системы: объём реакционной системы можно пропорционально изменять в диапазоне 5–25 мкл; не рекомендуется превышать 50 мкл.
3. Оптимизация концентрации: конечные концентрации праймеров и зондов можно регулировать в диапазоне от 0,1 до 1 мкМ для достижения наилучшего результата амплификации.
ROX используется для коррекции базового уровня флуоресцентного сигнала; выбор следует осуществлять с учётом модели прибора для qPCR, чтобы обеспечить точность количественного анализа.
1. РОКС Хай : Совместимо с моделями Applied Biosystems® 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT, StepOne™, StepOnePlus™ и другими;
2. РОКС Низкий : Совместимо с моделями Applied Biosystems® 7500, ViiA™7, QuantStudio™ 12K Flex, Agilent Mx3000P™, Mx3005P™, Mx4000™ и другими;
3. Не требуется ROX : Совместимо с приборами серий Rotor‑Gene™, Opticon™, Chromo4™, LightCycler®, Bio‑Rad CFX96, Illumina Eco™ и другими.
Оптимизирован специально для метилированных образцов, обладает широкой устойчивостью к высокому содержанию GC и высокой устойчивостью к действию bisульфита, подходит для различных видов ДНК‑образцов после конверсии.
1. Подходящие шаблоны: образцы ДНК, прошедшие сульфитное преобразование, стандарты метилирования, плазмидные шаблоны, геномная ДНК и др.;
2. Диапазон совместимости с ГК: подходит для матриц с содержанием гуанина‑цитозина от 25% до 70%; целевые последовательности с различным содержанием ГК стабильно амплифицируются.
3. Устойчивость: обладает высокой устойчивостью к урацилу, обладает сильной способностью распознавать несоответствующие основания на 3′‑конце и хорошо совместим с особенностями оснований ДНК после сульфитного преобразования;
4. Рекомендация по выбору набора: при проведении анализа метилирования в качестве реактива для сульфитной модификации рекомендуется использовать наш продукт JSR530.
Стандартная двухшаговая программа амплификации позволяет гибко настраивать параметры в зависимости от содержания GC‑нуклеотидов в матрице и значения Tm праймеров.
1. Стандартная процедура qPCR (двухшаговый метод):
• Предварительная денатурация: 95 °C, 30 с, 1 цикл;
• Циклы амплификации: денатурация при 95 °C в течение 10 с, аннелирование/элонгация при 60 °C в течение 30 с с регистрацией флуоресценции; всего 35–45 циклов.
2. Оптимизация параметров:
• Предварительная денатурация: для шаблонов с высоким содержанием Г‑Ц можно увеличить время до 3–5 минут, чтобы обеспечить полную денатурацию шаблона;
• Температура отжига: устанавливается в зависимости от значения Tm праймеров и зондов; диапазон — 50–65 °C; для первичных экспериментов рекомендуется предварительная проба при 60 °C.
• Количество циклов: при стандартном анализе — 35–40 циклов; для образцов с низкой копийностью число циклов можно увеличить до 45.
Аномалии кривой амплификации чаще всего обусловлены такими факторами, как калибровка прибора, концентрация матрицы, наличие пузырьков воздуха и настройки базовой линии; их можно устранить путём целенаправленной диагностики:
1. Кривая негладкая Причины: система не откалибрована, концентрация шаблона слишком низкая, неверно выбран ROX;
Решение: произвести повторную калибровку флуоресцентной системы прибора, повысить концентрацию матрицы и убедиться в совместимости ROX с прибором.
2. Разрыв/спад кривой Причина — слишком высокая концентрация образца и неправильный выбор диапазона для построения базовой линии;
Решение: уменьшить концентрацию образца, заново задать диапазон базовой линии и избежать участков с флуктуациями флуоресценции.
3. Отдельные кривые резко падают Причина — наличие пузырьков газа в реакционной трубке, что мешает флуоресцентному детектированию;
Решение: перед загрузкой в прибор мгновенно центрифугировать ПЦР‑тубы, удаляя пузырьки воздуха со дна и стенок.
Отсутствие амплификации или повышенное значение Ct может быть связано с множеством факторов — образцом, реагентами, программой, праймерами и др.; последовательная проверка каждого из них позволяет быстро выявить причину.
1. Без кривой амплификации Распространённые причины и способы их устранения:
• Недостаточное число циклов: рекомендуется установить не менее 40 циклов;
• Сигнал не регистрируется: убедитесь, что в режиме двухшагового цикла сбор флуоресценции включён на стадии аннелирования‑удлинения;
• Деградация праймеров: целостность праймеров проверяется методом ПАГЭ‑электрофореза; при обнаружении деградации праймеры синтезируют заново.
• Слишком низкая концентрация матрицы/деградация: увеличьте объём вводимой матрицы или подготовьте её заново.
2. Значение Ct повышено Распространённые причины и способы их устранения:
• Низкая эффективность амплификации: оптимизируйте условия реакции, попробуйте трёхэтапный метод амплификации или перепроектируйте праймеры;
• Низкая концентрация матрицы: уменьшите степень разведения матрицы, увеличьте объём образца;
• Слишком длинные продукты ПЦР: рекомендуется поддерживать длину амплифицированных продуктов в диапазоне 80–150 п.н.;
• Присутствие ингибиторов ПЦР: увеличьте степень разведения матрицы или повторно очистите её.
Три распространённые категории экспериментальных проблем, соответствующие различным вариантам оптимизации:
1. В контрольной пробе отрицательного образца наблюдается явное амплификация. ：
Причины: загрязнение реакционной системы, неспецифичность дизайна праймеров;
Решение: заменить реактивы, воду и праймеры; проводить работы в ламинарном боксе для снижения загрязнения аэрозолями; перепроектировать праймеры с целью повышения их специфичности.
2. Линейная зависимость стандартной кривой недостаточно хороша. ：
Причины: погрешность при добавлении образцов, деградация стандартного образца, чрезмерно высокая концентрация матрицы;
Решение: увеличить кратность разведения образца и объём добавляемого образца, заново приготовить стандартные образцы и оптимизировать диапазон градиентных концентраций.
3. Плохая воспроизводимость эксперимента ：
Причины: неоднородный объём добавляемого образца, слишком низкая концентрация матрицы;
Решение: использовать пипетки с более высокой точностью, уменьшить степень разведения матрицы или увеличить объём добавляемого образца; предварительно смешать общие компоненты и затем расфасовать их по отдельным пробиркам.
Связанные продукты
Консультация по заказу: менеджер Ху
Консультация по заказу: менеджер Ан
Консультация по заказу конечного пользователя-заказчика из области научных исследований
Техническая консультация: технический специалист Бай
Служба поддержки клиентов
Douyin
Видео-аккаунт WeChat
Kuaishou
Контакты
Jianshi Biotechnology (Beijing) Ltd. Компания с ограниченной ответственностью.
Адрес компании: г. Мапо, район Шуньи, г. Пекин, дом 12, дом 11, комната 401
Телефон: 86 18640171737
Электронная почта: gwang@jianshibio.com
Jianshi Biotechnology (Zhejiang) Ltd. Компания с ограниченной ответственностью.
адрес: город Юяо, провинция Чжэцзян
Телефон: 86 18640171737
Оставить сообщение
Если вас заинтересовали наши продукты, пожалуйста, оставьте свой номер телефона.
Проконсультироваться сейчас →Подписка на продукт
Подпишитесь на нас, чтобы быть в курсе обновлений продуктов и специальных предложений
Авторское право: Jianshi Biotechnology (Beijing) Co., Ltd. Powered by：CEglobal