Набор для клонирования TA (JSR‑E‑403)
Название продукта | Артикул | Упаковка, спецификация | Цена |
Комплект для клонирования TA | JSR-E-403-A | Коробка | Запрос цены |
Комплект для клонирования TA | JSR-E-403-B | Коробка | Запрос цены |
Ключевые слова
Категория
Описание продукта
Часто задаваемые вопросы
Информация о продукте
Связанные документы
Реагентный набор для ТА‑клонирования компании «Цзяньши Био» (серия JSR‑E‑403)
Обзор продукта
Данный продукт представляет собой набор для TA‑клонирования (артикулы JSR‑E‑403‑A, JSR‑E‑403‑B), в основе которого — вектор pMD19‑T и высокоактивная ДНК‑лигаза T4; он специально предназначен для проведения экспериментов по TA‑клонированию ПЦР‑продуктов. Вектор создан на основе модифицированного pUC19 и оптимизирован с учётом свойства 3′‑концов ПЦР‑продуктов, полученных с помощью Taq‑полимеразы, что обеспечивает высокую эффективность клонирования. Сопутствующая ДНК‑лигаза T4 способна соединять как комплементарные, так и незамкнутые концы ДНК, а также восстанавливать одноцепочечные разрывы в нуклеиновых кислотах. Набор характеризуется высокой активностью β‑галактозидазы: окрашивание в синий/белый цвет происходит быстрее и интенсивнее, что облегчает визуальный отбор положительных клонов. Встроенный контрольный фрагмент длиной 500 п.н. позволяет настраивать положительный контроль; предусмотрены два режима: ночное соединение при 16 °C или быстрое соединение за короткое время; совместимость со всеми видами компетентных клеток, адаптированных к pUC19. Все компоненты набора следует хранить при −20 °C; перед выпуском осуществляется строгий контроль качества; с момента продажи предоставляется годовая гарантия; предназначено исключительно для научно‑исследовательских экспериментов (RUO).
Особенности продукта
- Высокоактивная ДНК‑лигаза T4, совместимая с липкими и ровными концами ДНК; способна восстанавливать одноцепочечные разрывы в ДНК; подходит для TA‑клонирования различных ПЦР‑продуктов.
- Специализированный TA‑клональный вектор pMD19‑T, созданный на основе модифицированного вектора pUC19, точно соответствует особенностям добавления аденозина в 3′‑конец ПЦР‑продуктов, что значительно повышает процент положительных клонов.
- Оптимизирована система отбора по сине‑белому колониям: активность экспрессии β‑галактозидазы повышена, окрашивание происходит быстрее, цвет колоний становится более насыщенным, а положительные клоновые колонии легко различимы невооружённым глазом.
- В комплекте — контрольный вставочный фрагмент длиной 500 п.н., который позволяет настроить положительный контроль и быстро проверить, работает ли система лигирования корректно.
- Гибкое соединение в двух режимах: позволяет достичь максимальной эффективности соединения при температуре 16 °C в течение ночи, а также обеспечивает быстрое кратковременное подключение, что делает устройство совместимым с различными экспериментальными циклами.
- Компетентные клетки широкого спектра, совместимые со всеми видами компетентных клеток, пригодными для вектора pUC19, могут использоваться вместе с данным набором реагентов;
- Стандартизированная стандартная реакционная система объёмом 20 мкл с чётко определёнными соотношениями компонентов; новички могут непосредственно готовить реакционный раствор, следуя указанной схеме.
- Полный и завершённый цикл лабораторных процедур, охватывающий все этапы — от соединения ДНК до термостимулированного трансформирования, инкубации бактериальных культур и скрининга по синим/белым колониям; низкий порог вхождения в работу.
- Рекомендации по оптимизации сопутствующих специализированных экспериментов: рекомендуется проводить электрофоретическое выделение и очистку продуктов ПЦР для удаления примесей, чётко устанавливать оптимальную температуру лигирования и условия инактивации фермента, чтобы избежать снижения эффективности клонирования.
- Все компоненты стабильно хранятся при низкой температуре —20 °C; перед отгрузкой проводится серийная контрольная проверка, что обеспечивает однородность и стабильность характеристик реагентов; в рамках послепродажного обслуживания предоставляется годовая гарантия.
Технические характеристики набора для клонирования TA (все типоразмеры)
| Классификация по спецификации | Артикул | Название продукта | Условия хранения |
|---|---|---|---|
| Комплект для клонирования TA, тип A | JSR-E-403-A | Комплект для клонирования TA, включающий вектор pMD19‑T, ДНК‑лигазу T4 и полный набор контрольных фрагментов вставки. | Хранить в тёмном месте при температуре -20℃ в герметичной упаковке. |
| Комплект для клонирования TA, тип B | JSR-E-403-B | Комплект для клонирования TA, включающий вектор pMD19‑T, ДНК‑лигазу T4 и полный набор контрольных фрагментов вставки. | Хранить в тёмном месте при температуре -20℃ в герметичной упаковке. |
Полная линейка наборов для клонирования TA от компании JianShi Bio JSR‑E‑403
Реагент для высокоэффективного TA‑клонирования ПЦР‑продуктов в вектор pMD19‑T — справочник по часто встречающимся проблемам
Ключевые преимущества продукта
- Высокоактивная Т4-лигаза : Совместим с липкими и ровными концами, восстанавливает одноцепочечные разрывы нуклеиновых кислот
- Вектор pMD19-T : Модификация pUC19, адаптированная для клонирования продуктов ПЦР с добавлением А‑нуклеотида на 3′‑конец
- Оптимизация сине-белого колонии : Высокая активность β‑галактозидазы, более быстрое и насыщенное окрашивание
- Сопроводительный положительный контроль : Встроенная контрольная вставка длиной 500 п.н. для проверки системы соединения
Артикул и параметры базовой системы
- Артикул товара : Две спецификации — JSR‑E‑403‑A и JSR‑E‑403‑B
- Концентрация носителя : pMD19-T вектор 50 нг/мкл
- Спецификация лигазы : ДНК-лигаза T4 10 Ед/мкл
- Стандартная реакция : Система объёмом 20 мкл, соотношение молей вставочного фрагмента к вектору — 3:1–5:1
Правила проведения реакций и хранения
- Подходящая температура соединения : ≤25℃, запрещается проводить работу при температуре выше 26℃
- Две схемы инкубации : 16℃, выдержка на ночь — 16 часов / 16℃, быстрое соединение — 30 минут
- Способ инактивации ферментов : 65℃ в течение 10 минут или 70℃ в течение 5 минут
- Применимые сценарии : Та‑клонирование продуктов обычной ПЦР, конструирование генетических векторов
Часто задаваемые вопросы по высокочастотному набору реагентов для клонирования JSR‑E‑403 TA
Наборы реагентов представлены в двух стандартизированных артикулах; вектор создан на основе модифицированного成熟的 pUC19‑вектора и специально адаптирован для проведения TA‑клонирования ПЦР‑продуктов.
1. Артикулы товаров: JSR‑E‑403‑A, JSR‑E‑403‑B;
2. Источник вектора: вектор pMD19‑T получен путём модификации вектора pUC19; для повышения эффективности лигирования используется свойство обычной Taq‑полимеразы автоматически добавлять аденозин в 3′‑конец ПЦР‑продуктов.
3. Вектор сохраняет все базовые функции pUC19 и совместим с общепринятой системой отбора по ампициллинорезистентности.
1. Длина вставляемого фрагмента установлена на уровне 500 п.н., концентрация — 50 нг/мкл;
2. Можно отдельно приготовить положительный контроль — связывающую трубку, чтобы проверить активность Т4‑лигазы в наборе реагентов и нормальность состава буферной системы;
3. При отсутствии белых колоний на клонировании с помощью положительного контроля можно быстро определить, связано ли это с неэффективностью реактивов или с проблемами, возникшими при работе с образцом и в ходе процедуры.
Высокоактивная Т4‑лигаза полностью удовлетворяет все стандартные требования к клонированию: она способна не только соединять ДНК, но и восстанавливать однонитевые разрывы в перекрёстных связях.
1. Пригодные к соединению концы: липкие концы ДНК, ровные концы ДНК;
2. Функция репарации: восстановление одноленточных разрывов в двойных цепях ДНК, в РНК‑цепях и в гибридных цепях ДНК/РНК;
3. Область применения: стандартная клонирование по методу TA, ферментативное сращивание векторов, эксперименты по восстановлению разрывов в фрагментах.
1. Ключевая оптимизация: выраженная активность экспрессии β‑галактозидазы в носителе;
2. Преимущества селекции: окрашивание сине‑белых колоний происходит быстрее, синяя окраска колоний более насыщенная, а белые положительные клоновые колонии лучше различимы;
3. Удобство эксперимента: нет необходимости длительно ждать проявления окраски; при отборе одиночных колоний можно быстро различать пустые синие колонии и рекомбинантные белые колонии.
Формирование кольцевой рекомбинантной ДНК чувствительно к температуре; высокие температуры непосредственно подавляют реакцию лигирования, что снижает выход положительных клонов.
1. Рекомендуемая температура реакции: на протяжении всего процесса поддерживать не выше 25 °C;
2. Негативное влияние высоких температур: при температуре окружающей среды выше 26 °C затрудняется образование кольцевых рекомбинантных плазмид, а эффективность лигирования существенно снижается;
3. Оптимизированный протокол: при повышенной комнатной температуре можно несколько увеличить продолжительность инкубации соединения, чтобы компенсировать снижение эффективности.
1. Рекомендуемое молярное соотношение: вставляемый фрагмент : вектор pMD19‑T = 3 : 1 ~ 5 : 1;
2. Общий объём реакционной смеси установлен на уровне 20 мкл; оставшийся объём доводят водой до требуемого значения.
3. Диапазон количества вектора: в стандартные трубки добавляют 20–100 нг вектора pMD19‑T; для положительного контроля фиксированно вводят 1 мкл исходного раствора вектора.
Для полной инактивации лигазы можно выбрать любой из двух вариантов инактивации, что исключает влияние остаточной ферментативной активности на трансформацию:
1. Вариант 1: нагревание в водяной бане при температуре 65 °C в течение 10 мин;
2. Вариант 2: нагревать в водяной бане при температуре 70 °C в течение 5 мин;
Непурифицированный продукт ПЦР содержит множество посторонних примесей, что существенно снижает процент положительных клонов:
1. Типы примесей: неспецифические короткие фрагменты‑примеси, которые невозможно разграничить при электрофорезе, остаточные праймеры ПЦР, побочные продукты dNTP;
2. Принцип интерференции: фрагменты‑примеси и праймеры конкурентно связываются с сайтом‑носителем, занимая эффективные участки для лигирования;
3. Оптимизированный протокол: вырезание геля с целью выделения целевой полосы, удаление всех примесей и значительное увеличение числа белых колоний‑продуцентов.
Каркас вектора основан на плазмиде pUC19, совместим с подавляющим большинством стандартных компетентных клеток для клонирования, не ограничиваясь использованием специализированных штаммов.
1. Область применения: совместимо со всеми компетентными клетками, пригодными для трансформации плазмидой pUC19;
2. Нет необходимости приобретать специализированные компетентные клетки; в лаборатории можно непосредственно использовать имеющиеся универсальные клонирующие клетки.
3. Для отбора колоний на планшетах единогласно используется LB-агар с добавлением ампициллина, IPTG и X‑галактозы.
Две схемы инкубации соответствуют различным требованиям к срокам проведения экспериментов; полный процесс трансформации включает все этапы — термический шок для восстановления, нанесение на чашку и отбор колоний.
I. Две схемы соединения и инкубации: 1. Инкубация при постоянной температуре 16 °C в течение 16 часов (на ночь): обеспечивает наивысшую эффективность соединения и является предпочтительным вариантом для стандартного клонирования; 2. Инкубация при постоянной температуре 16 °C в течение 30 минут: позволяет быстро и экономично провести процедуру, однако эффективность соединения несколько снижается.
II. Основные этапы полной трансформации и отбора: 1. Взять 10 мкл лигированного продукта и добавить к 100 мкл компетентных клеток; выдержать в ледяной бане 30 мин; 2. Провести термический шок в водяной бане при 42 °C в течение 90 с, затем немедленно вернуть образец на лёд и оставить на 5 мин; 3. Добавить 890 мкл жидкой среды LB и инкубировать при 37 °C с перемешиванием в течение 60 мин для восстановления; 4. Нанести на агаровые пластинки с антибиотиком (Amp), IPTG и X‑Gal; инкубировать при 37 °C до образования одиночных колоний и отбора белых положительных клонов; 5. Выделить колонии с белыми очагами и определить размер вставочного фрагмента методом ПЦР.
Связанные продукты
Консультация по заказу: менеджер Ху
Консультация по заказу: менеджер Ан
Консультация по заказу конечного пользователя-заказчика из области научных исследований
Техническая консультация: технический специалист Бай
Служба поддержки клиентов
Douyin
Видео-аккаунт WeChat
Kuaishou
Контакты
Jianshi Biotechnology (Beijing) Ltd. Компания с ограниченной ответственностью.
Адрес компании: г. Мапо, район Шуньи, г. Пекин, дом 12, дом 11, комната 401
Телефон: 86 18640171737
Электронная почта: gwang@jianshibio.com
Jianshi Biotechnology (Zhejiang) Ltd. Компания с ограниченной ответственностью.
адрес: город Юяо, провинция Чжэцзян
Телефон: 86 18640171737
Оставить сообщение
Если вас заинтересовали наши продукты, пожалуйста, оставьте свой номер телефона.
Проконсультироваться сейчас →Подписка на продукт
Подпишитесь на нас, чтобы быть в курсе обновлений продуктов и специальных предложений
Авторское право: Jianshi Biotechnology (Beijing) Co., Ltd. Powered by：CEglobal